一、项目简介

本发明属于生物技术领域。本发明针对缺乏稳定的雄性专养的家蚕品系的不足，提供一种制备雌性胚胎致死家蚕品系的方法及其中间品系和构建体。本发明人经过广泛的研究和反复的试验，将Cas9基因定点插入家蚕W染色体，从而获得的转基因家蚕，所获得的转基因家蚕均为雌性，且只有雌性表达该Cas9基因，实现了Cas9基因的性别特异性表达，进而将其和表达重要生殖基因Tra2特异性sgRNA的家蚕杂交，所获得的杂交家蚕，是雌性胚胎致死的，只有雄蚕存活且正常生长，达到了专养雄蚕的效果。

二、专利摘要

本发明公开了一种制备雌性胚胎致死家蚕品系的方法及其中间品系和构建体。将家蚕品系W-Cas9和家蚕品系Tra2-sgRNA交配，获得G2代，即雌性胚胎致死家蚕品系。制备W-Cas9的方法包括以下步骤：1)制备TALEN双质粒，其中左边TALEN识别序列为序列表中SEQ ID NO:1，右边TALEN识别序列为序列表中SEQ ID NO:2，体外转录获得TALENs mRNA；2)构建配体质粒，其包括从5’端到3’端的以下可操作性连接的元件：TALENs靶点、左同源臂、Cas9基因表达盒、右同源臂和TALENs靶点；3)共转家蚕新鲜卵得G0代，G0代自交得G1代，即得。本发明利用TALENs和CRISPR/Cas9技术在家蚕中定点靶向胚胎发育必须基因，致使胚胎发育期所有雌性均致死，从而建立家蚕雄性专养品系，可以大幅提高家蚕生丝品质。

三、专利状态

本技术已递交中国专利申请，申请号：201810111406.5，实质审查中；持有人项目编号：SIPPE18-06。

四、持有单位

中国科学院分子植物科学卓越创新中心。

五、合作方式

转让、许可或合作研发。

六、联系方式

张雯，wzhang@cemps.ac.cn，021-54924138。