一、项目简介

本发明属于代谢工程技术领域。本发明选择肠杆菌科细菌或至少含EC 1.1.99.4或EC 1.1.1.274酶编码基因之一的微生物比如柠檬塔特姆氏菌作为底盘细胞，替换已有报道GDK 途径中的PQQ依赖型膜结合葡萄糖脱氢酶为NAD（P)+依赖型，构建成为还原力平衡的GDK途径（rGDK途径），葡萄糖到2-酮基-L-古龙酸理论转化率提升至100%。同时叠加竞争途径和副产物途径关键酶包括葡萄糖激酶、葡萄糖酸激酶、2-酮醛糖还原酶和PTS系统组分磷酸组氨酸搬运蛋白的敲除和增强2，5-二酮基-D-葡萄糖酸内运蛋白(或称内向转运蛋白，importer)表达，从而可以将葡萄糖到2-酮基-L-古龙酸实际转化率显著提升，有望为工业生产2-酮基-L-古龙酸的异源合成提供基础。

二、专利摘要

本发明提供了一种构建2-酮基-L-古龙酸生产菌株的方法，包括任意顺序的如下步骤中的一个以上：1)中断塔特姆氏菌染色体中膜结合葡萄糖脱氢酶编码基因；2)中断葡萄糖激酶编码基因；3)中断葡萄糖酸激酶编码基因；4)中断2?酮醛糖还原酶编码基因和/或其同工酶编码基因；5)重组表达NAD(P)+型葡萄糖脱氢酶；6)重组表达NAD(P)H型2,5-二酮基-D-葡萄糖酸还原酶；7)过表达2,5-二酮基-D-葡萄糖酸内运蛋白ARU92990和ARU92994；8)中断细胞染色体中PTS组分编码基因，得到基因工程菌。本发明构建的2-酮基-L-古龙酸生产菌可以通过一步发酵法或全细胞催化以葡萄糖为原料生产2-酮基-L-古龙酸，具有工业化开发前景。

三、专利状态

本技术已递交中国专利申请，申请号：201910788355.4，实质审查中；持有人项目编号：SIPPE18-60。

四、持有单位

中国科学院分子植物科学卓越创新中心。

五、合作方式

转让、许可或合作研发。

六、联系方式

张雯，wzhang@cemps.ac.cn，021-54924138。