一、项目简介

本发明属于基因工程领域。为了克服现有技术的双质粒CRISPR-Cas9基因编辑系统的缺陷，发明人设计了一种新的思路，包括如下策略：1. 将pCas质粒上lacI/trc启动子替换为鼠李糖诱导型启动子(rhaS/rhaR)来控制切割辅助质粒DNA序列的gRNA，避免在某些大肠杆菌比如BL21（DE3) 中渗漏转录切割辅助质粒，从而能在更多类型的大肠杆菌中实现基因组编辑；2. 将pCas质粒上的温敏型复制子pSC101ts更换为pSC101，使得大肠杆菌能在37℃下快速生长，避免需低温（ECCRISPR1.0为30℃）培养的限制，缩短了实验周期；3.将sacB基因添加至pCas质粒上，可用于质粒丢除时在蔗糖平板上进行反筛，代替原先的低温反筛。最终获得升级版质粒pEcCas(ECCRISPR2.0)。本发明的目的在于提供一种通用型的大肠杆菌基因组编辑工具。

二、专利摘要

本发明公开了一种基于CRISPR?Cas的大肠杆菌基因组编辑工具，其包括用于表达核酸内切酶Cas9的质粒pEcCas，该质粒pEcCas包括cas9核酸酶基因、λ-RED重组酶基因、araC蛋白基因、sacB基因、复制子pSC101、鼠李糖调节蛋白RhaS/RhaR基因、用于将Cas9导向辅助质粒DNA序列的sgRNA序列。该基因组编辑工具能够在B系、K-12系大肠杆菌中实现基因组编辑，缩短了编辑周期，且宿主的适应性更广。

三、专利状态

本技术已递交中国专利申请，申请号：201911291240.0，实质审查中；持有人项目编号：SIPPE19-35。

四、持有单位

中国科学院分子植物科学卓越创新中心。

五、合作方式

转让、许可或合作研发。

六、联系方式

张雯，wzhang@cemps.ac.cn，021-54924138。